Autoklaavin sterilointivaikutuksen varmennus

Yksi mikrobiologisen laboratorion välttämättömistä laboratorioinstrumenteista on sterilointiaine, ja autoklaavit ovat yleisimmin käytetty tyyppi. GB 4789.1-2016: n mukaan laboratoriolaitteet on tarkastettava ja/tai kalibroitava säännöllisesti (asianmukaisella merkinnöillä), ylläpidettävä ja huoltattava toiminnan suorituskyvyn ja turvallisuuden varmistamiseksi. Mutta suoritetaanko sterilisaattorisi samanlaisia ​​tarkastuksia? Jos tällaista validointia vaaditaan, miten se tulisi suorittaa?

Tänään tiivistämme steriloinnin tehokkuuden validoinnin keskeiset näkökohdat autoklaveille.

Yleisiä menetelmiä autoklaavin sterilointitehokkuuden validoimiseksi ovat kemiallinen indikaattorimenetelmä, kiinteän pisteen lämpömittarin menetelmä, itse valmistettu lämpötila-anturin menetelmä ja biologinen indikaattorimenetelmä. Näiden menetelmien taustalla olevat periaatteet ovat samanlaisia, keskittyen ensisijaisesti sen varmistamiseen, saavuttaako sterilointin lämpötila vaaditun tason steriloinnin aikana. Laboratorion erityisolosuhteista riippuen voidaan valita yksi tai useita menetelmiä.

1. Kemiallisen indikaattorimenetelmä
Periaate: Kemialliset indikaattorit läpikäyvät värimuutoksen tai muodonmuutoksen altistuessaan tiettyyn lämpötilaan ja kestoon, mikä mahdollistaa arvioinnin siitä, onko sterilointiparametrit täytetty.

Yleisesti käytetty indikaattori laboratorioissa on 3M: n autoklaavi -indikaattori, joka muuttaa väriä ennen sterilointia ja sen jälkeen tehokkuuden osoittamiseksi. Tämä teippi on valmistettu lämpöherkistä kemikaaleista ja värikehittämisaineista, jotka on painettu raidoiksi erityisellä liimateipillä. Nauha on levitettävä pakkauksen ulkopuolelle, vähimmäispituudella 5 cm ja painettava tiukasti paremman tarttumisen ja tiivistyksen saavuttamiseksi. Steriloinnin jälkeen 121 ° C: ssa 20 minuutin tai 130 ° C: n ajan 4 minuutin ajan nauhan diagonaaliset valkoiset raidat muuttuvat täysin mustiksi. Jos värimuutos on epätasainen tai puutteellinen, paketti ei ehkä ole täyttänyt sterilointiolosuhteita.

2. Kiinteäpisteinen lämpömittarin menetelmä
Periaate: Tämä menetelmä käyttää elohopealämpömittaria, joka säilyttää korkeimman lämpötilan, joka on samanlainen kuin perinteinen kliininen lämpömittari. Se auttaa määrittämään autoklaavin sisällä saavutetun maksimilämpötilan steriloinnin aikana.

Validointia varten elohopealämpömittari asetetaan suureen vedellä täytetyn kartiomaisen pullon sisään. Steriloinnin aikana pullo on sijoitettu autoklaavin sekä ylä- että alaosiin. Steriloinnin jälkeen lämpömittarin lukeminen tarkistetaan vaaditun lämpötilan perusteella. Tämä menetelmä kuitenkin vain varmistaa lämpötilan eikä vahvista, oliko steriloinnin kesto riittävä, mikä tekee siitä alkulaarin autoklaavien validoinnin kannalta.

3. Itse tekemä lämpötilakoetin menetelmä
Periaate: Tämä menetelmä hyödyntää tiettyjen kemikaalien sulamis- ja uudelleenkiteyttämisominaisuuksia, kun ne altistetaan lämmölle. Tiivistämällä nämä kemikaalit pienten lasiputkien sisällä ja asettamalla ne autoklaaviin, kidemuodostus steriloinnin jälkeen voi viitata, saavutettiinko vaadittu lämpötila.

Yleisesti käytetty reagenssi on bentsoehappo, jonka sulamispiste on 121–123 ° C, mikä vastaa tarkkaan vaadittua sterilointilämpötilaa. Steriloinnin aikana kiinteä bentsoehappo suljetaan pieneen lasiputkeen ja asetetaan autoklaaven sisään. Prosessin jälkeen bentsoehapon kiderakenne tutkitaan sen määrittämiseksi, saavutettiinko vaadittu lämpötila.

Kuten kiinteän pisteen lämpömittarin menetelmä, tämä lähestymistapa osoittaa vain lämpötilan eikä voi vahvistaa, oliko steriloinnin kesto riittää.

4. biologinen indikaattorimenetelmä
Periaate: Tämä menetelmä käyttää ei-patogeenisiä Geobacillus stearothermophilus-itiöitä indikaattoriorganismeina lämpöterilaation tehokkuuden arvioimiseksi. Nämä itiöt ovat erittäin kestäviä lämmölle ja niillä on lämmönkestävyys, joka on samanlainen kuin Clostridium botuliini -itiöt, mikä tekee niistä luotettava viite arvioidakseen, täyttääkö autoklaavi sterilointivaatimukset.

Biologiset indikaattorit ovat kolmessa muodossa:

Itiöiden suspensiot
Itiönauhat
Itiönauhat yhdistettynä viljelyalustaan ​​(biologiset indikaattoriputket)
Biologiset indikaattorit sijoitetaan tyypillisesti viiteen sijaintiin sterilointikammion sisällä:

Alempi taso: edessä, keskimmäinen ja takaosa
Ylätaso: keskusta
Steriloinnin jälkeen indikaattorit ympätään bromokresoliin violetti-glukoosipetonevesiin ja inkuboidaan 55–60 ° C: ssa 2–7 päivän ajan:

Jos viljelmäväliaine pysyy selkeänä ja muuttumattomana, itiöt on tapettu, mikä osoittaa tehokkaan steriloinnin.
Jos väliaine muuttuu keltaiseksi ja sameaksi, itiöt ovat selvinneet, mikä tarkoittaa, että sterilointiprosessi oli tehoton.
Sama validointimenetelmä koskee sekä itiöiden suspensioita että itiöliuskoja.

Monet laboratoriot käyttävät myös kaupallisia biologisia indikaattoriputkia, jotka toimivat samalla tavalla kuin iäntät suspensiot ja nauhat. Nämä putket sisältävät G. stearothermophilus -itiöitä yhdessä viljelyalustan lasillisen ampullin kanssa. Autoklatsin jälkeen putken sisällä oleva lasi -ampulli murskataan viljelyalustan vapauttamiseksi ja putkea inkuboidaan 56 ° C: ssa, ja siihen sisältyy positiivinen kontrolli.

Jos sterilointi oli tehotonta, elinkelpoiset itiöt kasvavat liemen keltaisena.
Jos sterilointi onnistui, itiöt ovat inaktivoituneita ja liemi pysyy violetina.
Autoklaavien validoinnin taajuus
Tällä hetkellä ei ole tiukkoja sääntelystandardeja, jotka määrittelevät, kuinka usein autoklaavit on validoitava. Laboratorioiden tulisi kuitenkin perustaa oma validointiaikataulu ja noudattaa sitä tiukasti.

Toiminnan ja luotettavan validoinnin helpottamiseksi kemiallinen indikaattoriteippi ja biologiset indikaattoriputket ovat erittäin suositeltavia. Nämä menetelmät ovat käyttäjäystävällisiä ja tarjoavat kattavan arvioinnin steriloinnin tehokkuudesta.

Autoklavingeen keskeiset näkökohdat
(Jotkut täysin automatisoidut tuodut autoklaavit eivät välttämättä vaadi manuaalista tuuletusta)

Autoklaavia käytettäessä on välttämätöntä poistaa kylmä ilma kammiosta tuomalla höyryä. Pakoputken tuuletusaukon tulisi pysyä auki, kunnes kaikki kylmä ilma on karkotettu, mikä varmistaa tasaisen lämpötilan jakautumisen sisällä.

Jos jokin ilma pysyy kammion sisällä, painemittari voi osoittaa oikean paineen, mutta todellinen lämpötila on odotettua alhaisempi. Mitä enemmän jäännösilmaa, sitä suurempi ero on, mikä johtaa epätäydelliseen sterilointiin.

(Niille, jotka kohtaavat ilmakuplia pienissä putkissa, kun steriloiva käymispohjainen väliaine, yritä lisätä ilman evakuointia tulosten parantamiseksi.)